自动化高通量阵列的lentivirus生产和定位

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 基因组学就是基因组学.

背景情况:

• 在lentiviral格式中生成排列的全基因组CRISPR库是复杂且资源密集的.
• 现有的方法往往是艰苦的,耗时的,昂贵的,阻碍了大规模的应用.

研究的目的:

• 开发一个完全自动化的工作流程,用于lentivirus的生产和定位.
• 为了解决手动方法生成数组化的lentiviral库的局限性.

主要方法:

• 使用了Biomek i7 Hybrid自动化工作站,集成多种仪器和SAMI EX软件.
• 实现了反向转化和三倍井,用于96井板中的lentivector生产.
• 开发了使用U937-mCherry细胞的定位方法和用于HEK293T细胞转换的线性回归模型,在不同的流细胞计上进行了验证.

主要成果:

• 平均每生产HEK293T细胞的转导单位 (TU) 达到3个病毒颗粒.
• 在不同流动细胞计 (R2 = 0.9) 的定位中显示出强大的可重复性.
• 在1,760个样本中,超过97%的样本产生了高位数 (中位数/平均值~1.2 x 10^6 TU/mL),超过了2x10^5 TU/mL的值.

结论:

• 自动化工作流提供了一个强大,可扩展和具有成本效益的平台,用于高吞吐量数组的lentiviral库生产.
• 这种自动化显著简化了功能基因组学研究必不可少的工具的生成.
• 开发的方法提高了lentiviral载体生成和定位的效率和可重现性.