纳米孔测定指纹DNA结合和定量实时裂变的催化活性Cas9酶的纳米孔测定

科学领域:

• 生物物理学的生物物理.
• 分子生物学分子生物学
• 纳米技术 纳米技术

背景情况:

• 纳米孔传感提供了高分辨率的DNA测序,但在长DNA上对酶-DNA复合物的定量分析方面存在困难.
• 检测与等离子体长度DNA结合的蛋白质是具有挑战性的,因为信号噪声比和高转位速度.

研究的目的:

• 开发精确的方法来检测利用纳米孔传感在DNA上的催化活性Cas9酶的位置.
• 在单个分子水平上实时量化Cas9的DNA裂变动力学.

主要方法:

• 利用事件电荷缺陷 (ECD) 分析高信号对噪声电信号在通过玻璃纳米孔复杂的转移过程中.
• 采用了依赖时间的测试方法来监测野生型Cas9核酶对目标DNA的酶分裂.

主要成果:

• 实现了Cas9与DNA单个或多个目标部位的准确位置检测.
• 量化了Cas9介导裂变后DNA产品释放的动力学.

结论:

• 建立了基于纳米孔的单分子感应方法,用于DNA-蛋白质复合体.
• 实时监测了涉及DNA修饰酶的生化反应,如Cas9.
• 这种技术可以促进对蛋白质结合和定位的理解,改善基于Cas9的基因组工程应用.