ADAPT-M:一种工作流程,用于对丰富蛋白质库进行快速的,定量化的体外测量

科学领域:

• 生物化学和分子生物学
• 蛋白质工程是指蛋白质工程.
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 蛋白质与蛋白质的相互作用对于细胞功能和治疗发育至关重要.
• 蛋白质结合剂的可扩展和定量表征是一个重要的瓶.
• 工程蛋白质结合剂为生物研究和药物发现提供了强大的工具.

研究的目的:

• 开发一个精简的工作流程,ADAPT-M,用于高通量亲和力和蛋白质结合剂的动力特征.
• 将酵母表面显示 (YSD) 与基于微流体的体外测量集成.
• 加速新型蛋白质结合剂的发现和工程.

主要方法:

• ADAPT-M的工作流连接了酵母表面显示 (YSD) 与基于微流体的亲和力和动力测量.
• 使用高通量STAMMPPING微流体平台进行定量分析.
• 可以在没有手动蛋白质净化的情况下对数百种蛋白质变体进行表征.

主要成果:

• 在不到一周的时间里,ADAPT-M对数百种蛋白质变体量化了解离常数 (Kd) 和解离动力参数.
• 成功应用于针对SARS-CoV-2 Omicron BA.1 RBD的图书馆,恢复和测量Kd的丰富变体.
• 测量结果显示,与生物层干扰测量和酵母滴定试验有很强的相关性.
• 启用了领先候选者的选择,揭示了尽管有非目标结合,但仍保留了设计的类动物.

结论:

• ADAPT-M有效地将YSD查与体外验证相结合,加速了蛋白质结合剂的发现.
• 工作流程支持数据驱动的蛋白质工程和新疗法的开发.
• ADAPT-M提供了一个可扩展和定量方法来表征蛋白质-蛋白质相互作用.