一光控制的CRISPR-Cas12b与循环介导的同热放大试验相结合,用于对Mycoplasma肺炎的临床检测
Wenhui Zhu1,2, Tao Qi1,2, Ze Wu1,2
1Department of Laboratory Medicine, Guangdong Provincial Key Laboratory of Precision Medical Diagnostics, Guangdong Engineering and Technology Research Center for Rapid Diagnostic Biosensors, Guangdong Provincial Key Laboratory of Single-Cell and Extracellular Vesicles, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China.
ACS sensors
|November 24, 2025
概括
一种新的光控制试验 (pHOLMESv2) 提高了133倍的Mycoplasma pneumoniae检测灵敏度. 这种临床试验为呼吸道病原体诊断提供了快速,准确的结果,无需复杂的样本准备.
科学领域:
- 分子诊断学 分子诊断
- 同热放大技术 同热放大技术
- 基于CRISPR的检测系统
背景情况:
- 菌性肺炎 (MP) 是一种常见的呼吸道病原体,需要敏感的护理点检测 (POCT).
- 现有的单LAMP/CRISPR-Cas12b (HOLMESv2) 系统用于MP检测,由于模板过早断裂,其灵敏度较低.
- 这种局限性阻碍了这些有前途的诊断工具的实际应用.
研究的目的:
- 开发一种光控制的循环介导同热放大 (LAMP) 和CRISPR-Cas12b测定 (pHOLMESv2),以克服Mycoplasma pneumoniae检测的灵敏度限制.
- 改进检测极限 (LoD) 并使简化POCT的直接样本分析成为可能.
- 用临床样本验证pHOLMESv2试验的性能.
主要方法:
- 一种光控制的HOLMESv2 (pHOLMESv2) 试验是使用带有NPOM修改的间隔区域的光导向RNA (gRNA) 开发的.
- 在LAMP反应期间,光防止了CRISPR-Cas12b过早活动,从而保留了DNA模板.
- 在LAMP后的光照射激活了gRNA来分裂放大产品,产生可检测的信号.
主要成果:
- 与原始的HOLMESv2系统相比,pHOLMESv2测定显示了LoD (7.5副本/μL) 的133倍改善.
- 该试验允许从用核酸释放剂处理的样本中直接检测,绕过复杂的提取步骤.
- 160个样本的临床评估为检测Mycoplasma pneumoniae产生了99.0%的灵敏度和100.0%的特异性.
结论:
- 照相控制的pHOLMESv2试验有效地防止过早的模板裂变,显著提高了Mycoplasma pneumoniae检测的灵敏度.
- 这种方法提供了一种简化,直接检测方法,使用稳定,冷解试剂,适合POCT.
- 与智能手机阅读器相结合,pHOLMESv2为Mycoplasma pneumoniae提供了一个高度灵敏,特定,便携且具有成本效益的诊断解决方案.
