在Cannabis sativa L中进行原生细胞分离,转染和培养的新协议

科学领域:

• 植物生物技术 植物生物技术
• 分子生物学分子生物学
• 大麻研究 大麻研究

背景情况:

• 原生质对于基因表达研究和基因组编辑至关重要.
• 大麻sativa L.具有重要的药用和工业价值.
• 以前试图从大麻原塑中再生植物的尝试由于植物的反抗性而失败了.

研究的目的:

• 开发一个有效的协议,用于大麻原生细胞的隔离,净化,短暂的转染和培养.
• 为了从大麻原塑中实现植物再生.

主要方法:

• 通过控制供体物质年龄,酶溶液成分和酶解质持续时间来优化原生质分离.
• 利用原生质嵌入营养丰富的介质和植物生长调节剂用于细胞壁重合成和分裂.
• 在基因传递中采用聚乙烯糖醇介导的转染.
• 测试了六种不同的再生介质,其中含有不同度的6 - 氨酸胺和thidiazuron.

主要成果:

• 获得高质原体产量 (2.2 × 10^6/g FW) 具有良好的活力 (78.8%) 和细胞壁重合成 (56.1%).
• 证明了成功的细胞分裂,涂层效率为15.8%.
• 在10天的培养中,报告了28%的转染效率和17%的涂层效率.
• 在两个月内在再生介质上观察到原生质衍生微的增殖和绿化.

结论:

• 建立了一个可靠的协议,用于大麻原生细胞的隔离,转染和培养.
• 该协议促进了基因功能调查,并促进了在大麻中的原生质融合和基因组编辑.
• 通过原塑技术为开发改进的大麻品种提供了基础.