对Cas12a变体的PAM兼容性进行基准测试,用于高通量酵母的基因变体工程
Weiyu Xie1,2,3, Zhenkun Cai1,2,3, Zehua Bao1,2,3,4
1Key Laboratory of Biomass Chemical Engineering of Ministry of Education, College of Chemical and Biological Engineering, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang, China.
Applied and environmental microbiology
|November 25, 2025
概括
我们开发了一个用于酵母基因组编辑的CRISPR/Cas12a系统,针对富含T的序列,以扩大基因变异工程超出CRISPR/Cas9的局限性.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 基因组学就是基因组学.
背景情况:
- 克里斯普尔/Cas9对于酵母功能基因组学至关重要,但受到富含G的PAM向限制.
- 扩大基因组编辑范围对于发现新的酵母功能至关重要.
研究的目的:
- 建立一个高效的CRISPR/Cas12a系统用于酵母基因组编辑,针对富含T的PAM序列.
- 扩大酵母基因组工程工具的准范围.
主要方法:
- 开发了一个同质性集成的CRISPR/Cas12a系统.
- 在酵母中对提高的LbCas12a (impLbCas12a) 的效率和PAM放松进行了基准测试并确定了它.
- 使用多重复合CRISPRRNA阵列用于同时安装遗传变异.
主要成果:
- 该CRISPR/Cas12a系统通过向富含T的PAMs,有效地安装遗传变异.
- 在酵母中确定了impLbCas12a作为最有效和PAM放松的Cas12a变体.
- 已证明有针对性的和突变和多重遗传变异安装.
结论:
- 该CRISPR/Cas12a系统扩大了酵母基因工程工具箱,补充了CRISPR/Cas9.
- 这种工具可以对更大的基因组序列空间进行询问,用于酵母菌的功能研究.


