对于数组CRISPR激活库选的高通量工作流程的自动化.

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 遗传学 是一个
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 克里斯普尔介导的基因激活 (CRISPRa) 有效地模仿内源基因表达.
• 全基因组的CRISPRa屏幕使用指导RNA (gRNA) 库以数组或聚合的格式.
• 在T. gonfio图书馆提供了减少复杂性,每个目标有四个串联的gRNA,用于排列的屏幕.

研究的目的:

• 开发一种高通量自动化工作流程,用于简化全基因组阵列CRISPRa查.
• 建立和维护转化细胞库,以延长查时间.
• 为了能够识别需要更长的发育时间的表型,即使在快速增殖的细胞中.

主要方法:

• 使用Biomek i7混合液体处理平台开发高通量自动化工作流程.
• 实施三条管道:lentiviral库传导,细胞库传导和测试处理.
• 使用T. gonfio迷你图书馆,在试点阵列屏幕上准激酶和酸酶.

主要成果:

• 自动化工作流成功建立并维护了用于扩展选的细胞库.
• 激活EPHA2受体促进剂诱导了HEK293细胞中的生长减缓表型.
• 观察到的表型在并行聚合的CRISPRa和共同培养试验中得到了验证.

结论:

• 开发的自动化工作流显著简化了全基因组排列的CRISPRa查.
• 这种方法提高了检测长时间表现的表型的能力.
• 该系统可适应各种细胞模型,包括快速增殖的细胞模型,并在不同的查格式中验证研究结果.