在人类冷保存的PBMC和全血中进行JAK/STAT信号分析的双酸-CyTOF工作流程
Ilyssa E Ramos1,2,3, Brynja Matthiasardottir4,5, Teresa S Hawley2,6
1Protein and Chemistry Section (PCS), Research Technologies Branch (RTB), National Institute of Allergy and Infectious Diseases, Bethesda, MD, USA.
Bio-protocol
|November 27, 2025
概括
我们优化了对冷保存细胞和全血的双-CyTOF工作流程,以分析免疫细胞中Janus激酶/信号转换器和转录激活器 (JAK/STAT) 信号. 这些方法揭示了用于免疫失调研究的微妙信号缺陷.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞信号传递 细胞信号传递
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 蛋白质酸化通过Janus 激酶/信号转换器和转录激活器 (JAK/STAT) 等途径调节关键免疫细胞功能.
- 对JAK/STAT信号的调节失调与免疫障碍,自身免疫和癌症有关.
- 单细胞光流细胞计 (phospho-CyTOF) 提供了高维分析,但在冷保存细胞和全血协议方面面临挑战.
研究的目的:
- 开发和优化双-CyTOF工作流程,用于分析冷保存的外周血液单核细胞 (cPBMC) 和全血 (WB) 中的JAK/STAT信号.
- 为了使STAT酸化在各种免疫子集中对各种细胞因子的反应进行全面的,高维的分析.
- 为在临床和研究环境中剖析JAK/STAT驱动的免疫反应提供可扩展和翻译相关的工具.
主要方法:
- 建立了针对cPBMC和WB样本的细胞因子刺激的优化双-CyTOF工作流.
- 利用纯重金属标记抗体,对20个表面标记物和STAT酸化进行高维剖析.
- 实施了WB样品的快速"静脉到管"处理和固定,以保持原生信号和细胞组成.
主要成果:
- 开发了强大的协议来分析JAK/STAT通路激活在主要的免疫子集使用-CyTOF.
- 证明了能够解决免疫子集并询问多种多重检测的JAK/STAT信号的能力.
- 完整血液样本中保存的脆弱骨髓质子集和本地信号背景.
结论:
- 优化的双-CyTOF工作流提供了一种强大的工具,用于剖析免疫细胞中微妙的JAK/STAT信号改变.
- 这些方法适用于临床免疫监测,JAK抑制剂的药理学研究和生物标志物发现.
- 工作流程有助于同时评估JAK/STAT路径与其他信号路径的交叉通话.
