开发一种重组膜蛋白ELISA,用于分析针对SARS-CoV-2包膜蛋白的抗体反应
Sylvie Chabot1, Tahir Malik1, Lila Saye1
1Division of Viral Products, Center for Biologics Evaluation and Research, Food and Drug Administration, Silver Spring, Maryland, USA.
The Journal of biological chemistry
|November 27, 2025
概括
研究人员开发了一种新方法,用于生产SARS-CoV-2信封蛋白用于诊断试验. 这种方法简化了抗原的产生,并显示了检测过去感染和免疫反应的潜力.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 蛋白质生物化学 蛋白质生物化学
背景情况:
- 重组病毒表面抗原通常在没有跨膜域的情况下表达,以简化生产.
- 膜蛋白的表达和净化,如SARS-CoV-2信封蛋白,存在重大挑战.
- 开发用于包裹病毒的强大的诊断工具需要高效的抗原生产策略.
研究的目的:
- 开发一种生产全长,预注射稳定SARS-CoV-2尖峰 (S),膜 (M) 和包膜 (E) 蛋白质的方法.
- 使用这些重组蛋白来检测SARS-CoV-2暴露,创建一种酶相关的免疫吸收试验 (ELISA).
- 评估开发的ELISA在区分过去感染和疫苗接种状态方面的表现.
主要方法:
- 将SARS-CoV-2的S,M和E蛋白融合到绿色光蛋白 (GFP) 和链球菌标签中,以增强昆虫细胞的表达和净化.
- 开发了一种ELISA,使用Strep-tag来显示抗原和GFP光来显示涂层的一致性.
- 用历史SARS-CoV-2患者样本和最近的健康志愿者样本测试ELISA.
主要成果:
- 成功生产和净化复合前输液稳定全长尖峰 (rS-GFP),膜 (rM-GFP) 和包膜 (rE-GFP) 蛋白质.
- 开发的ELISA与早期患者样本 (55%S阳性) 相比,最近的健康志愿者样本 (∼85%S阳性) 的反应性更高,表明SARS-CoV-2抗原暴露增加.
- 没有GFP的重组S (rS) 检测到比单独的重组受体结合域更多的S阳性样本.
- 来自RS和受体结合域的结合ELISA数据与S伪型粒子中和度相关.
结论:
- 开发的融合蛋白策略简化了具有挑战性的包裹病毒抗原的生产.
- 艾丽莎测试显示了通过感染或接种疫苗来评估SARS-CoV-2暴露的潜力.
- 这种方法可以适应开发其他包裹病毒的诊断试验.
