设计一种与CRISPR相关的IscB系统,用于在人类细胞和小鼠胚胎中开发微型基因组编辑工具

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 基因编辑技术的技术
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• IscB蛋白质是紧的CRISPR相关酶,是Cas9在体内传递的潜在替代品.
• 像OgeuIscB这样的现有IscB系统在真核生物中起作用,但需要特定的目标相邻基因 (TAM).
• 需要更高效和多功能的微型基因组编辑工具.

研究的目的:

• 描述一种与CRISPR相关的新型IscB系统,DelIscB,它可以识别灵活的TAM.
• 为增强活动设计DelIscB,并开发微型基础编辑器.
• 评估工程DelIscB系统的体内适用性.

主要方法:

• 对DelIscB蛋白及其单导向RNA (sgRNA) 的系统工程.
• 工程设计的endDelIscB与T5外核酶 (T5E) 融合以进行DNA裂变.
• 用于基编辑的endDelIscB尼克酶与细胞因子或腺脱氨酶的融合.
• 通过微注射mRNA/sgRNA.RNA来生成小鼠模型.

主要成果:

• 与野生类型相比,工程EnDelIscB的活动增加了48.9倍.
• enDelIscB-T5E在人类细胞中表现出高效的DNA裂变,与enIscB-T5E相当.
• 通过使用enDelIscB nickase.建立了高效的微型基础编辑器 (ICBE和IABE).
• 在使用enDelIscB和enDelIscB-T5EmRNA/sgRNA.sgRNA的小鼠模型中成功生成.

结论:

• 工程DelIscB系统 (enDelIscB) 提供了显著增强的基因组编辑活动.
• 基于DelIscB的工具,包括核酶和基编辑器,是高效的,适合于体内应用.
• 这些微型基因组编辑工具对各种治疗和研究应用具有很大的前景.