开发和应用一种快速双RPA-LFS测定方法,用于同时检测Enterococcus faecalis和Enterococcus faecium

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子诊断学 分子诊断
• 传染性疾病 传染性疾病

背景情况:

• 肠球菌 (Enterococcus faecium) 和肠球菌 (Enterococcus faecalis) 是领先的医院病原体,随着多种药物耐药性和食物传播的增加,它们构成了严重的公共卫生威胁.
• 目前的检测方法,如基于培养的打字和qPCR,耗时,需要专门的设备,并且可能具有高的假阴性率,阻碍了快速反应.
• 对于这些关键病原体而言,需要一个快速,可在现场部署的诊断工具,这对于有效的治疗和制策略至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种快速,同时检测Enterococcus faecium和Enterococcus faecalis的检测试剂.
• 解决现有方法的局限性,包括长时间的周转时间,物种差异化挑战和依赖复杂的实验室仪器.
• 为前线应用提供用户友好,无设备的诊断解决方案.

主要方法:

• 设计和优化双重重组合聚合酶放大-侧流带 (RPA-LFS) 试验,使用特定物种的原料和探针.
• 纳入5'-FITC/DIG报告组和3'-生物素修改,通过THF裂变生成信号.
• 在10分钟内优化反应条件 (37°C20分钟) 以在侧流带上进行视觉解释.

主要成果:

• RPA-LFS测定显示出高灵敏度,检测E. faecalis低至10 CFU/mL,E. faecium低至10^2 CFU/mL,即使在复杂的样本矩阵中也是如此.
• 达到100%的特异性,没有与30种其他细菌菌株进行交叉反应.
• 使用435个唾液分离物的临床验证产生了100%的灵敏度和特异性,明显优于传统培养方法.
• 整个过程,包括物种分化,在没有专用设备的情况下,在40分钟内完成.

结论:

• 开发的RPA-LFS测定提供了一个快速,灵敏,特定和无设备的方法,用于同时检测和区分E. faecium和E. faecalis.
• 这种测试比传统方法有了显著的进步,提供了不到40分钟的周转时间.
• 该工具对精确抗微生物疗法,食品安全监测和前线抗微生物耐药性制工作具有变革潜力.