通过CRISPR-Cas9系统,优化CHO细胞中的重组蛋白质生产,通过杀Caspase 8关联蛋白2基因

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物加工是一种生物加工.

背景情况:

• 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞对于生产复杂生物制药至关重要.
• 提高CHO细胞生产率对于满足日益增长的生物制剂需求至关重要.
• 卡斯帕酶8-关联蛋白2 (CASP8AP2) 调节细胞亡和细胞存活,成为提高生产力的目标.

研究的目的:

• 为了研究沉默CASP8AP2对CHO细胞生产力和抵抗力的影响.
• 评估CASP8AP2作为改善生物制药制造的目标的潜力.

主要方法:

• 采用CRISPR介导的同质独立向整合 (HITI) 来使CHO细胞中的CASP8AP2沉默.
• 使用甲酸盐 (NaBu) 进行了细胞活力测试,以评估耐药性.
• 使用记者蛋白 (JRed和光酶) 来量化蛋白质的产量.

主要成果:

• 与野生类型细胞相比,CASP8AP2缺乏的CHO细胞克隆对NaBu的抵抗性增加,IC50值更高.
• 沉默克隆显示显著增强JRed (高达1.9倍) 和 luciferase (高达1.7倍) 的表达.
• 增强的蛋白质生产与S阶段的细胞循环停止相关.

结论:

• 通过基因沉默准CASP8AP2是一种有前途的策略,可以提高CHO细胞的生产率和生物处理效率.
• 需要对治疗生物制剂和生物反应器设置进行进一步研究,以确认工业可扩展性.
• 转录组分析将提供更深入的洞察力,了解受CASP8AP2.2影响的亡和代谢途径的潜在机制.