难以被移除的宿主细胞蛋白质在腺相关病毒下游加工中的表征
Thomas M Leibiger1, Lie Min1, Kelvin H Lee1
1Department of Chemical and Biomolecular Engineering, University of Delaware, Newark, DE 19713, USA.
Molecular therapy. Methods & clinical development
|December 1, 2025
概括
通过使用染色学,开发了一种用于腺相关病毒 (AAV) 的新净化方法. 这种可扩展的过程有效地去除宿主细胞蛋白 (HCP),改善治疗应用的AAV纯度.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物制药制造业 生物制药制造业
- 病毒载体净化 病毒载体净化
背景情况:
- 基因相关病毒 (AAV) 是基因治疗的一个有前途的载体.
- 对于临床应用而言,AAV的高效净化是至关重要的.
- 现有的净化方法在可扩展性和杂质去除方面面临挑战.
研究的目的:
- 开发一个可扩展的,无血型的下游净化平台,用于腺相关病毒 (AAV).
- 通过不同的染色学步骤来表征残留宿主细胞蛋白 (HCP) 清除.
- 了解在AAV净化过程中HCP保留的机制.
主要方法:
- 开发一个三步染色学平台:亲和染色学 (AC),离子交换染色学 (AEX) 和多模式抛光染色学 (MMC).
- 使用所有理论碎片离子质谱 (SWATH-MS) 的顺序窗口获取来识别和量化HCPs的定量蛋白质学分析.
- 在悬浮HEK293细胞中产生的四种AAV血清型 (AAV2, -5, -8和 -9) 的分析.
主要成果:
- 下游过程实现了累积载体基因组 (VG) 产量在44.6%至69.2%之间.
- 在所有AAV样本中,全囊缩度在2.62至5.93倍之间.
- 在AC,AEX和MMC之后,HCP人数大幅减少,分别剩下880,99和21名HCP人数.
结论:
- 开发的染色学平台是有效的可扩展的,血清型不可知的AAV净化.
- 载体介导机制,如囊或基因组关联,有助于难以移除的HCPs的保留.
- 这项研究提高了对AAV下游加工中的杂质清除的理解,有助于未来的净化工艺设计.
