在哺乳动物细胞中使用光蛋白rsTagRFP和rsEGFP2的双色超分辨率cryoCLEM
Mart G F Last1, Maartje van Klaveren1, Lennert Janssen1
1Department of Cell and Chemical Biology, Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands.
Journal of structural biology
|December 1, 2025
概括
研究人员开发了双色冷单分子定位显微镜 (cryoSMLM) 用于超分辨率冷电子断层扫描 (SRcryoCLEM). 这种方法允许高精度同时准同一细胞内的两个蛋白质结构.
科学领域:
- 细胞和分子成像技术
- 生物物理学的生物物理.
- 低温电子显微镜 低温电子显微镜
背景情况:
- 超分辨率冷电子断层扫描 (SRcryoCLEM) 可实现细胞结构的高分辨率成像.
- 化单分子局部化显微镜 (cryoSMLM) 为SRcryoCLEM提供了高分辨率.
- 目前的冷SMLM方法仅限于针对单个蛋白质结构,因为缺乏兼容的光标签.
研究的目的:
- 为SRcryoCLEM开发一种双色cryoSMLM方法.
- 为了使同一个细胞内的两个不同的蛋白质结构能够同时准.
- 扩大SRcryoCLEM的功能,用于多目标蛋白质的定位.
主要方法:
- 开发并使用了一对兼容的红色和绿色光标签,rsTagRFP和rsEGFP2.
- 在冷保存的哺乳动物细胞上进行双色cryoSMLM.
- 相关的冷SMLM与冷电子断层扫描 (cryoET) 用于高分辨率成像.
主要成果:
- 在哺乳动物细胞中证明了成功的双色冷SMLM成像.
- 实现了两个独立结构的同时准和识别:MAP2装饰的微管和维门中间丝.
- 在同一单元中验证了30nm的定位精度.
结论:
- 引入了一种新的双目标SRcryoCLEM方法,使用rsTagRFP和rsEGFP2.
- 克服了冷SMLM中单个点蛋白质局部化的局限性.
- 实现了高分辨率的多个蜂组件的精确,同时可视化.
