自动基因操纵用于构建Pichia pastoris细胞工厂
Yimeng Zuo1, Lingling Jin2,1,3, Jiachen Zhang2,1
1Zhejiang Key Laboratory of Intelligent Manufacturing for Functional Chemicals, ZJU-Hangzhou Global Scientific and Technological Innovation Center, Zhejiang University, Hangzhou 310000, China.
Chem & bio engineering
|December 4, 2025
概括
自动化合成生物技术可以快速建造Pichia pastoris细胞工厂. 这种高吞吐量平台加速了基因操纵和促进体表征,以增强生物合成.
科学领域:
- 合成生物学 合成生物学
- 生物技术是生物技术.
- 微生物工程是微生物的工程.
背景情况:
- 皮奇亚牧草是一种非模型微生物,具有重组蛋白表达和天然产品生物合成的潜力.
- 合成生物学有助于微生物细胞工厂的建设,但面临着诸如低吞吐量和手工实验等挑战.
- 自动化合成生物技术提供高吞吐量,自动化和智能,以加速设计-构建-测试-学习周期.
研究的目的:
- 开发一种自动化的基因操纵过程,以快速建造和优化Pichia pastoris细胞工厂.
- 提高基于热冲击的转换和P. pastoris.基因组编辑的效率.
- 鉴定内源性促进体的特征,并建立酵母细胞工厂,用于生产基烯.
主要方法:
- 使用自动化系统优化关键参数 (热冲击温度,还原剂,DNA/sgRNA等离子体量).
- 在P. pastoris.中进行高通量基因组编辑和促进体表征 (96个内源性促进体).
- 酵母细胞工厂的建设,使用特征性促进剂来生产二.
主要成果:
- 在P. pastoris.中实现了基于热冲击的高效转换和高通量基因组编辑.
- 单位和双位基因组编辑效率分别达到94.6%和36.3%.
- 鉴定了96种内源性促进体的强度和时间流程特征,使得能够成功地建造生产基的酵母细胞工厂.
结论:
- 自动基因操纵过程显著加速了P. pastoris细胞工厂的建设和优化.
- 这种高通量方法为P. pastoris和其他非模型酵母物种的自动基因操纵提供了有价值的参考.
- 开发的平台有助于有效的生物合成有价值的化合物,如塞斯奎特.
