通过alkyne-azide循环添加对多巴胺D2受体和葡萄糖皮质体受体进行无净化固定,用于基于亲和色谱的药物查

科学领域:

• 生物化学和生物技术
• 染色学和分离科学 染色学和分离科学
• 药物发现和开发 药物发现和开发

背景情况:

• 传统的蛋白质固定用于亲和色谱,往往导致功能损失和多步净化挑战.
• 高通量药物查需要高效可靠的基于蛋白质的染色学方法.

研究的目的:

• 开发一种通用策略,利用遗传密码扩展和点击化学制造高效的染色学方法.
• 为了使受体的直接,定向和共价固定不动,而无需先前净化,保持其活性.
• 应用选天然产品和评估类似药物特性的方法.

主要方法:

• 利用遗传密码扩展以特定地将p-azidophenylalanine (pAzF) 纳入多巴胺D2受体 (DRD2) 和葡萄糖皮质体受体 (GR).
• 在pAzF受体和二环氧 (DBCO) 功能化之间进行无铜点击反应时,采用应变促进的酸循环添加 (SPAAC).
• 使用XPS,SEM/EDS和免疫光学来表征固定阶段;评估稳定性,特异性和可重现性. 分析了Wendan Decoction的成分,并进行了细胞测试.

主要成果:

• 成功开发了固定DRD2$_{pAzF}$和GR$_{pAzF}$静止相,其受体活性保持,特异性高,稳定性 (>30天),可重复性 (RSD<1%).
• 确定了液化素,新素和纳灵素作为温丹开中的活性成分,液化素和新素作为双重标配体.
• 确定的结合亲和度和计算的类似药物效率指数 (SEI,BEI,LLE);在细胞分析中确认的生物活性和点特异性.

结论:

• 综合战略简化了可靠的受体染色学方法的构建,推动了天然产品的领先发现.
• 这种方法将查与结合性亲和度测量和潜在候选药物的初步药物相似性评估相结合.
• 开发的方法为高通量药物查和天然产品的表征提供了一个强大的平台.