基于RPA-CRISPR/Cas12a的核酸检测方法用于克拉米迪亚psittaci

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 公共卫生 公共卫生

背景情况:

• 冠状病毒 (C. psittaci) 感染越来越多地与严重的呼吸系统疾病和公共卫生爆发有关.
• 延迟或误诊的C. psittaci有助于疾病的严重程度和死亡率.
• 快速准确的检测方法对于及时干预和有效管理C. psittaci.至关重要.

研究的目的:

• 开发一种快速,灵敏和特定的核酸检测方法来检测Chlamydia psittaci.
• 建立使用RPA-CRISPR/Cas12a系统的克拉米迪亚psittaci检测试验.
• 与qPCR相比,评估开发的方法的性能.

主要方法:

• 设计了特定的RPA原料和CRISPRRNA (crRNA),针对C. psittaci.的保存的CPSIT_0429基因.
• 建立了一个两步的RPA-CRISPR/Cas12a试验和一个包含甘油的单管变异.
• 评估检测极限,针对常见呼吸道病原体的特异性,并与qPCR比较结果.

主要成果:

• 两步RPA-CRISPR/Cas12a试验实现了2 × 10°拷贝/μL的检测极限.
• 一管测定表明检测极限为2×102副本/μL,含有20%的糖.
• 该方法具有高特异性,没有与流感病毒,SARS-CoV-2或肺炎链球菌的交叉反应,并且与qPCR结果具有很高的一致性.

结论:

• RPA-CRISPR/Cas12a系统提供了一种快速,准确,敏感和特定的C. psittaci检测方法.
• 这种核酸检测平台适用于早期诊断和C. psittaci感染的临床管理.
• 开发的试验提供了一个可靠的工具,以应对C. psittaci爆发所带来的挑战.