清除组织双视角斜平面显微镜

科学领域:

• 生物医学光学 生物医学光学
• 显微镜的使用方法
• 生物光子学 生物光子学

背景情况:

• 对厚厚的,光学清理的生物组织进行成像,在保持空间分辨率和光学质量方面存在挑战.
• 现有的显微镜技术经常与折射率不匹配和密集样品中有限的透深度作斗争.

研究的目的:

• 引入一种新型的双视角斜平面显微镜 (dOPM),用于对厚度,光学清理的生物样本进行高分辨率体积成像.
• 描述dOPM的性能,特别是其远程重定焦能力和在不同折射率的空间分辨率.
• 通过成像各种生物标本,包括癌症组织和整个生物体来证明dOPM的多功能性.

主要方法:

• 开发一个定制的远程重定焦继电器,使用折射率匹配样品的库存光学.
• 使用光珠幻象 (RI 1.4-1.5) 进行空间分辨率表征,以确定点传播函数 (PSF) FWHM.
• 应用采集,图像拼接和多视图图像融合,用于全面的体积重建.
• 对光学清除的小鼠组织 (卵巢癌,骨髓,结肠) 和整个Drosophila melanogaster*大脑的成像.

主要成果:

• 在与折射率匹配的样本中,分别达到0.5μm和1μm的侧向和轴向分辨率.
• 在轴距>250μm的轴距范围内显示了最小的分辨率降解.
• 使用客观校正项圈,展示了高达n=1.5的折射率变化的有效补偿.
• 成功完成了毫米宽的组织样本和整个果大脑的多色体积成像.

结论:

• 该dOPM提供了一个强大的平台,用于快速,高分辨率,多色体积成像的大型生物样本.
• 该系统将先进的光学技术集成到商业显微镜框架上,提供可访问性和广泛应用性.
• 这项技术能够在多个尺度上对复杂的生物结构进行详细的研究,推动各种生命科学领域的研究.