活细胞定量FRET成像通过QuanTI-FRET中的自校准来简化
Julien Leblanc1, Alain H Lombard1, Adrien Saumureau1
1Laboratoire Interdisciplinaire de Physique (LIPhy), Université Grenoble Alpes, CNRS, 38000, Grenoble, France.
The European physical journal. E, Soft matter
|December 12, 2025
概括
我们简化了活细胞中的量化光共振能量转移 (FRET) 测量. 我们的新自动校准方法消除了对单独校准实验的需求,使FRET分析更容易获得.
科学领域:
- 细胞和分子成像技术
- 生物物理学的生物物理.
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 使用光共振能量转移 (FRET) 的基因编码生物传感器,可以实时监测细胞生化活动.
- 定量FRET分析对于可靠的生物学见解至关重要,但由于复杂的校准程序和对实验设置的依赖,通常会受到阻碍.
- 以前的方法,如定量三图像FRET (QuanTI-FRET) 提供了绝对的FRET概率,但需要额外的实验步骤进行校准.
研究的目的:
- 在活细胞中开发一种用于定量FRET测量的简化协议.
- 为FRET生物传感器引入一种直接使用实验数据的自校准方法.
- 提高定量FRET分析的可访问性和可重复性.
主要方法:
- 通过利用分子内FRET生物传感器固有的恒定静态度,直接进行系统校准.
- 在QuanTI-FRET框架内实施自动校准,利用校准过程的稳定性.
- 通过将结果与使用活细胞FAK生物传感器图像的标准校准进行比较来验证自校准方法.
主要成果:
- 证明了FRET生物传感器的成功直接校准,仅使用实验数据集.
- 展示了 QuanTI-FRET 校准的稳定性,即使校准数据集质量不同,也允许准确的自校准.
- 通过简化实验工作流程实现了定量FRET测量.
结论:
- 拟议的自校准方法显著简化了活细胞中定量FRET分析的实验协议.
- 这种方法通过减少实验复杂性和依赖外部校准标准来提高定量FRET的可访问性.
- 提供了公开可用的软件和napari插件,以促进采用这种简化的定量FRET协议.
