对可溶性hScFv-IL-17A与未配对的CDR-L3氨酸表达系统的大肠杆菌表达系统的比较评估
Weeraya Thongkum1, Kanokporn Sornsuwan2, Thanathat Pamonsupornwichit3
1Office of Research Administration, Chiang Mai University, Chiang Mai 50200, Thailand; Division of Clinical Immunology, Department of Medical Technology, Faculty of Associated Medical Sciences, Chiang Mai University, Chiang Mai 50200, Thailand; Center of Biomolecular Therapy and Diagnostic, Faculty of Associated Medical Sciences, Chiang Mai University, Chiang Mai 50200, Thailand.
Journal, genetic engineering & biotechnology
|December 12, 2025
概括
该BL21 (DE3) DisCoTune系统有效地产生可溶性人性化单链可变片段 (hScFv-IL-17A),以准17A. 虽然C97S突变增加了产量,但它减少了结合亲和力,使得野生类型蛋白质成为治疗开发的首选候选人.
科学领域:
- 生物技术和蛋白质工程
- 免疫学和治疗性抗体的开发.
- 微生物表达系统是微生物表达系统.
背景情况:
- 介素-17A (IL-17A) 是炎症性疾病中的一个关键细胞因子.
- 人性化单链可变片段 (hScFv) 具有治疗潜力,但需要高效的生产系统.
- 大肠杆菌 (E. coli) 是复合蛋白表达的常见宿主.
研究的目的:
- 系统地评估大肠杆菌表达系统,以产生hScFv-IL-17A.
- 为了比较一个野生类型的hScFv (hScFv-IL-17A-WT) 与一个C97S突变 (hScFv-IL-17A-C97S).
- 评估C97S突变对蛋白质溶解性,产量和抗原结合性质的影响.
主要方法:
- 在大肠杆菌菌株Origami B (DE3),SHuffle和BL21 (DE3) 中表达hScFv-IL-17A变异的表达.使用DisCoTune系统.
- 使用SDS-PAGE和西式涂抹分析蛋白质溶解度和产量.
- 通过酶相关免疫吸收试验 (ELISA) 和生物层干涉计 (BLI) 评估抗原结合性质.
主要成果:
- 与DisCoTune一起的BL21 (DE3) 证明了hScFv-IL-17A两种变体的最高可溶性表达产量.
- C97S突变显著增加了可溶性蛋白质产量,但显著降低了结合亲和力 (约. 减少了10倍).
- hScFv-IL-17A-WT表现出强大的结合亲和力 (KD = 3.64 × 10-8 M),而hScFv-IL-17A-C97S显示出减少的亲和力.
结论:
- C97S突变增强了大肠杆菌中可溶性蛋白的产量,但损害了hScFv-IL-17A.A.的功能结合活性.
- 使用DisCoTune系统在BL21 (DE3) 中生产的野生型hScFv-IL-17A是治疗开发中最有前途的候选人.
- 优化大肠杆菌表达系统对于产生功能治疗抗体至关重要.
