用于糖基工程应用的Drosophila melanogaster β1-3-galactosyltransferase的表征和工程
Linhan Wang1, Jichao Wei2, Fang Yuan3
1School of Biological Engineering, Dalian Polytechnic University, Dalian, 116034, China; School of Health and Life Sciences, University of Health and Rehabilitation Sciences, Qingdao, 266113, China; National Glycoengineering Research Center and Shandong Provincial Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Glycobiology, and State Key Laboratory of Microbial Technology, Shandong University, Qingdao, 266237, China.
Carbohydrate research
|December 14, 2025
概括
达到了Drosophila melanogaster β1-3-Galactosyltransferase (DmC1GalT1) 的高产表达. 这种酶对O-甘氨酸的合成和工程至关重要,主要的残留物被确定为基质特异性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 葡萄糖生物学 葡萄糖生物学
- 酶学 是一种酶学.
背景情况:
- 来自Drosophila melanogaster (DmC1GalT1) 的β1-3-Galactosyltransferase对于O-甘氨酸的合成至关重要.
- DmC1GalT1在糖基工程应用中具有显著的潜力.
研究的目的:
- 在大肠杆菌中实现DmC1GalT1的高产量的表达和净化.
- 描述酶的基质特异性,并确定活性和稳定性的关键残留物.
- 为合成糖生物学设计DmC1GalT1变体.
主要方法:
- 在大肠杆菌中DmC1GalT1的高产量的表达和净化.
- 用各种糖和核酸糖进行酶活性测定.
- 位点定向的突变发生和结构分析.
- 使用ProStab的热稳定性预测.
主要成果:
- 获得了超过5mg/L的纯化DmC1GalT1.
- 该酶对UDP-Gal和银基化人类CD74衍生Tn-glycopeptides显示了严格的供体特异性.
- 突变性研究确定了N108和Y325的残留物,这些残留物对于供体识别和特异性至关重要.
- 工程变体表现出改变的活性,稳定性和基质利用概况.
结论:
- 为DmC1GalT1表达,表征和工程建立了一个高效的平台.
- 确定了影响捐赠者识别的关键残留物,使得有针对性的工程成为可能.
- 这项工作有助于为合成糖生物学开发定制的糖转移酶变体.
