新型异构CAR T细胞平台,涉及微同质介导的末端连接修复和低的脱潜力

科学领域:

• 免疫治疗是一种免疫疗法.
• 基因编辑 基因编辑
• 细胞疗法细胞疗法

背景情况:

• 全基因化学抗原受体 (CAR) T细胞疗法经常使用CRISPR-Cas进行基因编辑.
• 克里斯普尔-卡斯的随机DNA修复机制带来了非目标突变的风险,挑战了CAR T细胞生成的安全性.
• 在临床应用中,开发更安全的方法来产生全源CAR T细胞至关重要.

研究的目的:

• 开发一种新的CRISPR RNA (crRNA) 策略,以实现更安全的全基CAR T细胞生成.
• 利用可预测的DNA修复途径来最大限度地降低非目标编辑风险.
• 为增强治疗潜力设计和评估CD3保留的,异构功能T细胞 (CRAFT细胞).

主要方法:

• 开发了一种针对T细胞受体β常数 (TRBC) 基因的新型CRISPR RNA (crRNA).
• 采用了AsCas12a Ultra和微同质介导端结合 (MMEJ) 的DNA修复途径,用于精确的T细胞编辑.
• 将 CD19 或 BAFF-R 向的 CAR 工程化到生成的 CRAFT 细胞中进行功能评估.

主要成果:

• 新的crRNA和MMEJ途径显著降低了初级人类T细胞的目标外编辑风险.
• 产生了一种独特的T细胞子集 (CRAFT细胞),具有破坏的T细胞受体 (TCR),保留了CD3表达,并且没有观察到体内全活性.
• CRAFT CAR T细胞表现出强大的抗原特异性细胞毒性,增强的活体扩张,和有效的效应器功能与双特异性T细胞参与者 (BiTEs).

结论:

• 克拉夫特crRNA平台提供了一种新的策略,用于生成更安全的异性CAR T细胞.
• CRAFT CAR T细胞对下一代免疫疗法表现出有前途的特征.
• CRAFT CAR T细胞和BiTE治疗的结合为临床应用提供了一个潜在的更持久的方法.