使用CRISPR/Cas9对2型威尔布兰德病的致病性VWF变体的等位基选择性破坏

科学领域:

• 基因治疗是一种基因疗法.
• 血液学 血液学 血液学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 目前对严重威兰氏病 (VWD) 的治疗依赖于威兰氏因子 (VWF) 度的静脉注射.
• 开发用于VWD的基因疗法是具有挑战性的,原因是遗传异质性和难以准内皮细胞中VWF的产生.

研究的目的:

• 为VWD患者开发一种新的基因治疗策略,这些患者具有异性主导-阴性VWF变体.
• 证明针对VWF中常见的单核酸多态 (SNP) 的等位基因选择性基因编辑的可行性.

主要方法:

• 利用CRISPR-Cas9技术引入插入/删除 (indels) 并破坏致病性VWF等位基因的开放读取框架 (ORF).
• 针对VWF的共同SNP rs1800378,以创建一个变种特定的策略.
• 使用来自VWD患者 (VWD2A和VWD2B) 的内皮形成殖民地细胞 (ECFC) 进行ex vivo原则证明实验.
• 应用下一代测序 (NGS) 和变异映射质谱分析基因编辑效率和VWF蛋白形表达.

主要成果:

• 通过使用CRISPR-Cas9.9实现了VWF变异的高效和等位基选择性淘汰.
• 从非标基因基因基因中成功维持VWF表达.
• 通过质谱测量证实了变体VWF等位基因表达的选择性减少.
• 在ECFC中观察到细胞疾病表型的逆转,表明治疗潜力.

结论:

• 开发的基因编辑策略是可行的治疗VWD引起的异合体主导-阴性VWF变体.
• 针对一个共同的SNP (rs1800378) 允许广泛适用于VWD的治疗方法.
• 这一策略为VWD提供了一种潜在的治疗方法,独立于特定的致病变体,致病机制或亚型.