通过Aptamer-Based Proximity Ligation和定量PCR同时检测SARS-CoV-2核体蛋白和RNA
Emil A Zaripov1, Carlos Gu1, Kalem Holmes1,2
1Department of Chemistry and Biomolecular Sciences, University of Ottawa, Ottawa K1N 6N5, Canada.
Analytical chemistry
|December 23, 2025
概括
这项研究引入了一种新型的诊断试验,该试验结合了aptamers和RT-qPCR,用于同时检测SARS-CoV-2RNA和核囊蛋白. 这种多重方法为快速病毒诊断提供了一个可扩展的策略,采用最小的样本处理.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子诊断学 分子诊断学
- 传染病研究 传染病研究
背景情况:
- 随着COVID-19的流行,人们越来越需要快速,灵敏和多重的病毒诊断测试.
- 实时定量聚合酶连锁反应 (RT-qPCR) 是SARS-CoV-2 RNA检测的标准,但抗原测定速度更快但敏感度更低.
- 同时检测病毒RNA和蛋白质对于准确有效的诊断至关重要.
研究的目的:
- 开发一种新型的诊断平台,同时检测SARS-CoV-2RNA和核体 (N) 蛋白在单个小瓶中.
- 结合近距离绑定阿普坦 (PLA) 与RT-qPCR进行增强的多重病毒检测.
- 在各种生物矩阵中评估双分析剂试验的灵敏度和适应性.
主要方法:
- 通过指数式丰富 (CE-SELEX) 识别了针对SARS-CoV-2 N蛋白的高亲和度体,使用基于毛细血管电泳的连接体的系统演化.
- 使用特定的TaqMan探针开发了一种集成PLA用于N蛋白检测和RT-qPCR用于RNA检测的双分析试验.
- 通过整合滴滴数字PCR (ddPCR) 和使用DEPC标记和蛋白质组学识别的aptamer结合部位,提高了测试灵敏度.
主要成果:
- 成功开发并验证了一种多重测定方法,用于同时检测SARS-CoV-2RNA和N蛋白.
- 证明了测试在缓冲和复杂的生物矩阵 (如唾液) 中的有效性.
- 通过整合ddPCR实现了提高灵敏度,展示了该平台改善诊断的潜力.
结论:
- 新的PLA-RT-qPCR平台能够同时,灵敏地,快速地检测SARS-CoV-2RNA和N蛋白.
- 这种可扩展和适应的策略为多重病原体诊断提供了显著的进步,采用最小的样本处理.
- 开发的方法为未来的诊断需求提供了一种多功能工具,解决了当前单分析剂测试的局限性.
