使用无损离子操纵结构的气相原生 (类似) 蛋白质的表征
Jung Yun Lee1, Viraj D Gandhi1, Christopher Harrilal1
1Biological Sciences Division, Pacific Northwest National Laboratory, Richland, Washington 99354, United States.
Analytical chemistry
|December 23, 2025
概括
无损离子操纵的多通道结构 (SLIM) 增强了气相蛋白质分离,准确地确定了电荷状态依赖结构. 这一进步使新的原生离子移动性光谱应用成为可能.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物物理化学 生物物理化学
- 分离科学 分离科学
背景情况:
- 无损离子操纵结构 (SLIM) 在气相中提供高分辨率的离子分离.
- 之前的SLIM应用程序专注于各种分子类,但蛋白质分析需要进一步开发.
研究的目的:
- 调查多通路SLIM用于将气相蛋白质分离在接近原始状态下.
- 分析电荷状态依赖的到达时间分布和蛋白质的结构变化.
- 为了验证SLIM衍生的碰撞截面 (CCS) 值与漂流管离子运动谱学 (DTIMS) 相比.
主要方法:
- 使用多通道SLIM分离用于碳酸无水酶 (CA),酒精脱酶 (ADH) 和阿波转移素.
- 使用校准曲线与Agilent Tune Mix离子获得的实验CCS值.
- 将多通道到达时间分布 (ATD) 解构为单通道值,用于CCS确定.
- 将SLIM衍生的CCS值与DTIMS测量值进行比较.
主要成果:
- 交流电荷状态的基线分离 (z=9+到11+) 通过8米单通SLIM实现.
- 改善了ADH (z=23+到25+) 的移动性峰值分辨率,其延长路径长度高达24米.
- 观察到从单模向多模CCS分布的apotransferrin (z=16+到18+) 的过渡.
- 使用40米多通路分离,证明了特定电荷状态的选择性隔离 (例如,阿波转移蛋白z=17+).
- SLIM分离对蛋白质结构和CCS值的影响最小.
结论:
- 多通SLIM有效地将近原始状态的气相蛋白分离,解决电荷状态依赖的结构.
- 该技术提供了与DTIMS相比的准确CCS值.
- SLIM对移动性选择性隔离的能力为原生离子移动性应用和进一步基于SLIM的操纵开辟了道路.
