基于SuFEx的可点击多目标交叉连接器,用于In Vivo交叉连接质谱仪
Yanhong Hao1, Moran Chen1, Xiao Huang1
1The Institute for Advanced Studies, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan University, Wuhan, Hubei 430072, China.
Analytical chemistry
|December 23, 2025
概括
研究人员开发了新的三功能交叉连接器 (SPSF) 用于体内交叉连接质谱 (XL-MS). 这种技术通过增加氨基酸覆盖率和识别新的交叉链接位,包括酸化相关的残留物来增强蛋白质结构分析.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 化学生物学 化学生物学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学
背景情况:
- 交联质谱 (XL-MS) 对于研究蛋白质结构和相互作用至关重要.
- 在XL-MS中氨基酸覆盖范围决定了分析深度和结构分辨率的准确性.
研究的目的:
- 设计和合成新的三功能交叉链接剂 (succinimidyl-propargyl-aryl sulfonyl fluoride - SPSF) 用于体内多目标交叉链接.
- 为了提高XL-MS分析的深度和准确性,以确定功能性蛋白质结构.
主要方法:
- 新型三功能交叉连接剂 (SPSF) 的合成,具有序列反应性 (succinimide 和 sulfonyl 化物).
- 在各种细胞区的体内交叉链接.
- 使用点击化学和生物素-链条维丁净化进行交叉链接识别的丰富策略.
- 分析交叉链接的网站及其功能域的丰富.
主要成果:
- 在体内,SPSF在最小的细胞干扰下,在细胞区间间进行有效的交叉链接.
- 通过点击化学丰富,改善了各种交叉链接 (lys-lys,lys-ser,lys-thr,lys-tyr,lys-his) 的识别.
- 通过SPSF介导的多站点交叉链接扩大了覆盖范围,特别是在素贫困地区.
- 在交叉连接的Ser,Thr,Tyr位点和酸化位点之间观察到很高的重叠.
- 交叉链接位点被丰富了蛋白质-蛋白质相互作用和核酸识别领域.
结论:
- 新型SPSF交叉连接器为XL-MS工具箱提供了有价值的补充,用于增强功能蛋白质结构分析.
- 该方法通过映射到功能域的交叉链接,提供了对蛋白质功能状态的更深入的见解.
- 多站点交叉连接能力扩大了XL-MS对复杂生物系统的范围和实用性.
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