在Saccharomyces cerevisiae中使用通用捐赠模板和多重CRISPR-Cas9进行无标记基因组编辑的协议

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 酵母遗传学 酵母遗传学
• 基因组工程是基因组工程.

背景情况:

• 克里斯普尔-Cas9技术使精确的基因组编辑成为可能.
• 在Saccharomyces cerevisiae中基于标记物的方法可能是繁的.
• 高效和代的基因组编辑对于酵母研究至关重要.

研究的目的:

• 开发一种无标记基因组编辑协议,用于Saccharomyces cerevisiae.
• 为了实现高效的基因删除和随后的标记物去除.
• 为了促进酵母中的代基因组编辑应用.

主要方法:

• 使用基于PCR的可选择标记卡塞特 (MX6) 进行基因删除.
• 使用可重复使用的导向RNA (gRNA) -Cas9等离子体进行标记器切除.
• 引入了通用修复模板,以在单个步骤中删除多重标记.
• 使用PCR分析验证无标记菌株.

主要成果:

• 在Saccharomyces cerevisiae中成功生成了无标记基因删除.
• 已被证明是高效的,单步式多重标记物去除.
• 通过使用相同标记物进行代基因组编辑,实现了易受代基因组编辑的菌株.
• 通过PCR分析验证的协议.

结论:

• 提出的协议为酵母提供了一种有效的无标记基因组编辑策略.
• 这种方法简化了Saccharomyces cerevisiae中的代基因组工程.
• 该协议有助于在酵母研究中简化基因操纵.