用CRISPR-Cas12a系统对西尼罗病毒系1a和2进行新型诊断工具

科学领域:

• 分子诊断学 分子诊断
• 病毒学 病毒学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 西尼罗河病毒 (WNV) 是由Culex蚊子传播的具有全球意义的病原体.
• 西尼罗神经侵入性疾病 (WNND) 具有很高的死亡率,强调由于缺乏治疗和疫苗,需要早期诊断.

研究的目的:

• 为西尼罗河病毒 (WNV) 开发快速,敏感和特定的诊断工具.
• 评估基于CRISPR的DETECTR (DNA内核酶向CRISPR转记者) 系统,与WNV检测的异热放大集成.

主要方法:

• 设计和实施使用逆转录-重组酶聚合酶放大 (RT-RPA) 的2步WNV DETECTR试验.
• 开发了一步WNV DETECTR试验,用于简化,单管处理.
• 优化了1步与波器WNV DETECTR方法以减少处理时间.
• 与其他方法相比,对Punch-itTM NA-Sample Kit用于样本溶解的评估.

主要成果:

• 两步WNV检测器检测到WNV系1a和2的RNA副本仅为1.0×10^2,其灵敏度与qRT-PCR相比,没有交叉反应.
• 一步式WNV检测器的检测极限为1.0×10^3RNA拷贝.
• 一步式WNV检测器显示了与两步式检测方法相比的检测极限,同时缩短了测试时间.
• 在快速样本准备方面,Punch-itTM NA样本套件被证明是有效的.

结论:

• 基于CRISPR-Cas12a的DETECTR方法为WNV诊断提供了一个有希望的替代方案,提供高特异性和灵敏度.
• 这些方法适用于现场诊断,有可能克服传统工具的财务和技术限制.
• 开发的测定方法促进了WNV的快速简单的放大和检测过程.