新型抗NS1人类单一域抗体来自登革热感染NS1阳性患者

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 登革热病毒 (DENV) 构成了严重的全球健康威胁,导致从发烧到致命的严重登革热的症状.
• 目前的治疗方法有限,登革热疫苗仍在开发中,这凸显了对新型治疗策略的需求.
• 抗体通过向特定的病毒蛋白质,在对DENV的免疫反应中发挥关键作用.

研究的目的:

• 从感染登革热病毒 (DENV) 的患者中分离和描述新型重链可变区域基因.
• 为了表达和净化这些新型抗体,对DENV.有潜在的治疗应用.
• 为了确认分离的抗体与DENV NS1蛋白的特定结合.

主要方法:

• 从DENV感染患者的外周血液单核细胞 (PBMCs) 中分离全长重链可变区域基因.
• 在大肠杆菌中蛋白质表达的表达载体 (pET-28a(+)) 中进行亚克隆,然后进行过度表达和净化.
• 通过竞争性抑制ELISA,剂量依赖性竞争性抑制ELISA和西式涂抹,确认对重组NS1 (rNS1) 的特定结合. 使用异热定位热量计 (ITC) 来量化结合亲和力.

主要成果:

• 新型重链可变区域基因被成功分离和测序,没有显示任何先前报告.
• 纯化的重链变量区域显示了对rNS1的特定结合,多次生物化学分析证实了这一点.
• 同热定位热量计 (ITC) 证实了rNS1与特定抗体 (SdAb3) 之间有利的结合热力学 (ΔG = -9.22 kcal/mol).
• 开发了一种优化的蛋白质重新折叠策略,使用含有氨酸,氨酸和糖的缓冲剂,以提高纯化蛋白质的溶解度.

结论:

• 已经确定了对DENV NS1蛋白具有特定结合亲和力的新型重链可变区域.
• 这些发现为开发针对登革热病毒的新型抗体治疗提供了基础.
• 优化蛋白质重新折叠对于这些新型抗体的成功应用至关重要.