快速,灵敏,低成本的EsCas13d和基于RPA的测试平台,用于快速准确地识别SVA

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 病毒学 病毒学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 核酸诊断对于控制像塞内卡谷病毒 (SVA) 这样的病毒爆发至关重要.
• 现有的方法往往需要专门的设备和受控的环境,限制它们在资源有限的环境中使用.
• 需要快速,灵敏和易于使用的诊断平台来进行医疗点检测 (POCT).

研究的目的:

• 开发和评估一种新的RNA检测平台,即可现场部署的异热酶溶解检测 (FIELD),用于SVA检测.
• 在速度,灵敏度,特异性和操作简单性方面评估FIELD的性能.
• 确定FIELD是否适合在资源有限的环境中部署以及用于POCT.

主要方法:

• FIELD集成了一个室温溶解协议 (2分钟) 与一个单步RPA-CRISPR/Cas13d反应 (30分钟).
• 检测极限是使用板读器 (8 副本/μL) 和视觉读取 (50 副本/μL) 来确定的.
• 测试对交叉反应性,温度稳定性 (体温和室温),试剂稳定性 (溶解),以及对RT-qPCR的临床性能进行了测试.

主要成果:

• 菲尔德在35分钟内检测到SVARNA,具有高灵敏度和特异性 (临床评估中为100%).
• 该平台没有证明与非目标病毒的交叉反应.
• 解热试剂长时间保持活性,系统在没有温度控制装置的情况下运行.

结论:

• FIELD是一个快速,灵敏和用户友好的RNA检测平台,适合资源有限的设置.
• 它的操作简单,最小的设备要求,稳定性支持现场部署和POCT.
• FIELD提供了一种可行的解决方案,用于控制超越传统实验室设置的SVA爆发.