[基于HBV共受体神经皮林-1的高效HBV感染细胞模型的构建]
1Department of Infectious Diseases, Key Laboratory of Molecular Biology for Infectious Diseases (Ministry of Education), Institute for Viral Hepatitis, the Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 401336, China Key Laboratory of Laboratory Medical Diagnostics, Chinese Ministry of Education, Chongqing 400016, China.
研究人员在HepG2-NTCP细胞中创建了一个稳定的细胞系,过度表达神经素-1 (NRP1). 这一新细胞系证明了乙型肝炎病毒 (HBV) 感染效率的两倍增加,为研究慢性乙型肝炎提供了有价值的工具.
科学领域:
- 肝病学和病毒学.
- 分子生物学和遗传学
背景情况:
- 乙肝病毒 (HBV) 感染依赖于特定的宿主细胞受体.
- 神经皮林-1 (NRP1) 被认为是HBV进入的潜在因素.
- 开发可靠的体外模型对于理解HBV病变发生至关重要.
研究的目的:
- 构建一个稳定的HepG2-NTCP细胞系,过度表达神经皮林-1 (NRP1).
- 评估工程细胞系对乙型肝炎病毒 (HBV) 感染的易感性.
- 建立一种用于调查慢性HBV感染机制的新工具.
主要方法:
- 采用无克隆技术,制造出表达NRP1.1的重组伦氏病毒等离子体.
- 用lentivirus转化HepG2-NTCP细胞,然后使用布拉斯提丁S除氨酶 (BSD) 和单克隆抗体进行选择,以获得稳定的NRP1过度表达.
- 通过量化HBV标志物 (cccDNA,mRNA,DNA,HBsAg,HBeAg,HBc) 使用西斑,RT-qPCR和光显微镜来评估HBV感染易感性.
主要成果:
- 通过限制酶消化和测序证实了NRP1表达的lentiviral等离子体的成功构造和验证.
- 在HepG2-NTCP细胞中,NRP1的稳定过度表达得到了Western blot,RT-qPCR和光显微镜的验证.
- 与对照细胞相比,NRP1过度表达细胞系的HBV感染效率大约增加了两倍,病毒标志物显著增加.
结论:
- 成功生成了一个稳定的HepG2-NTCP细胞系,具有高水平的NRP1过度表达.
- 这种工程细胞系支持高效的HBV感染在体外.
- 开发的细胞系作为一种有价值的新工具,用于研究慢性乙型肝炎感染背后的分子机制.
更多相关视频
11:34A Competent Hepatocyte Model Examining Hepatitis B Virus Entry through Sodium Taurocholate Cotransporting Polypeptide as a Therapeutic Target
Published on: May 10, 2022
09:35Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle
Published on: February 1, 2017