开发用于Leuconostoc mesenteroides的高效电解协议

科学领域:

• 食品生物技术 食品生物技术
• 微生物学 微生物学
• 合成生物学 合成生物学

背景情况:

• *Leuconostoc mesenteroides* 在食品生物技术中至关重要,用于生产代谢产物和外聚糖.
• 由于DNA转移效率低,核酶活性高以及限制修饰系统,对*L. mesenteroides*的基因操纵具有挑战性.
• 现有的电穿孔方法产生不一致的结果,阻碍了代谢工程和合成生物学.

研究的目的:

• 为*L. mesenteroides*菌株H32-02 Ksu.开发和验证一个可重复的电穿孔协议.
• 为了克服阻碍这种菌株基因转变的特定障碍.
• 为了提高菌株对生物技术应用的基因工程的适应性.

主要方法:

• 优化细胞壁削弱和透保护步骤.
• 开发了一种用于膜透的温和电刺激.
• 建立了恢复条件,以尽量减少细胞死亡和DNA降解.
• 将等离子体DNA甲基化模式与受体的限制概况相匹配.
• 选择了一种具有可兼容的甲基化特征的大肠杆菌菌株,用于塑体生产.

主要成果:

• 与基线相比,转换效率提高了40倍.
• 在8 × 10^2 CFU μg^-1 DNA. 的最大化转换效率.
• 通过优化等离子体源,通过优化等离子体源,证明了变换剂产量增加了3.5倍.
• 通过降低脉冲电压,变压数增加了3倍.
• 首次为变压器提供一致和可重复的访问.

结论:

• 开发的协议显著提高了L. mesenteroides*的转换效率和可重复性.
• 通过优化基因操纵技术,可以克服Leuconostoc的菌株特异性障碍.
• 这种方法为构建用于食品生物处理和表达异质酶的改进菌株提供了基础.
• 这些原则可能可转移到其他具有类似基因操纵挑战的乳酸细菌中.