开发和应用DENV-2的快速现场检测技术,基于哈德森核酸提取无/RT-RAA/CRISPR-Cas12a系统

科学领域:

• 医学昆虫学 医学昆虫学
• 分子生物学分子生物学
• 公共卫生 公共卫生

背景情况:

• 全球登革热发病率正在快速增长,这对公众健康构成了重大挑战.
• 快速地在现场检测登革热病毒 (DENV) 对于及时诊断,患者隔离和控制疫情至关重要.
• 登革热病毒血清型2 (DENV-2) 是热带和亚热带地区的主要菌株,是监测的关键目标.

研究的目的:

• 为在现场检测DENV-2开发一种快速的,单管测定方法.
• 为了提高效率,将无核酸提取方法与放大和基于CRISPR的检测相结合.
• 为基于现场的DENV-2监测提供实用工具,特别是在资源有限的环境中.

主要方法:

• 建立了一个单管测定方法,结合了HUDSON无核酸提取协议,反转录重组酶辅助放大 (RT-RAA) 和CRISPR/Cas12a.
• 使用模拟感染样本评估了测试的检测极限.
• 对其他DENV血清型和相关的树病毒 (Zika,JE,YF,CHIKV) 进行了检测.
• 评估不同样本类型 (蚊子,动物,血液,培养细胞) 的性能,并与定量PCR (qPCR) 进行比较.

主要成果:

• 对于模拟的DENV-2样本,实现了1 × 10^2副本/μL的检测极限.
• 没有与DENV-1,DENV-3,DENV-4或其他测试过的树冠病毒进行交叉反应.
• 在各种样本类型中显示出高灵敏度和特异性,结果与qPCR一致.
• 通过使用基本设备,在1小时内启用了DENV-2现场检测.

结论:

• 开发的试验是一种简单,经济有效和可靠的工具,用于快速地在现场检测DENV-2.
• 这种方法支持有效的公共卫生响应和资源有限的地区的现场监测.
• 该试验为DENV-2的早期诊断和疫情控制提供了实际解决方案.