一个带有等级叶片的多层μDicer可以实现保护蛋白质的微解剖到10μm

科学领域:

• 生物技术和生物医学工程 生物技术和生物医学工程
• 蛋白质组学和分子分析
• 癌症研究 癌症研究

背景情况:

• 激光捕获微解剖 (LCM) 是用于分离分子造型感兴趣区域 (ROI) 的标准.
• 传统的LCM在细胞尺寸 (∼10μm) 上面临限制,原因是激光诱导的损伤和捕获挑战,影响蛋白质的保存.
• 亚毫米尺度组织异质性研究需要精确的微解剖技术.

研究的目的:

• 引入和评估多层μDicer作为一种新的机械微解剖工具,用于生成统一的微组织.
• 将μDicers的蛋白质输出与LCM在小空间分辨率 (低至10μm) 上进行比较.
• 评估微解剖方法对蛋白质保存和蛋白质组分析中的定量准确性的影响.

主要方法:

• 使用双光子聚合制造的多层μDicer的制造.
• 使用μDicers和传统的LCM,将以乙醇固定的人类状细胞癌组织切片机械切割成微组织 (低至10μm).
• 微组织的蛋白质组分析使用一个中的纳米滴处理用于痕迹样品 (纳米POTS) 和液态染色体质谱法 (LC-MS).

主要成果:

• 多层μDicer可复制地剖析微组织到10μm.
• μDicer产生的和蛋白质明显超过LCM,特别是在10-20μm的空间分辨率.
• 与μDicers相比,LCM生成的微组织表现出物质损失 (弹射器相关的腔),可能会减少蛋白质覆盖.

结论:

• 多层μDicer为细胞尺寸的微解剖提供了一种优越的方法,保持高蛋白覆盖率.
• 这种机械方法克服了LCM的局限性,提高了蛋白质组数据的质量和定量准确性.
• μDicers有可能推进下一代空间蛋白质工作流,特别是当与空间注册集成时.