通过RPA-CRISPR/Cas12a试验开发布鲁塞拉的视觉和光检测方法
Hafiz Muhammad Hamza Rasool1, Xiaowei Gong1, Youshun Jin1
1State Key Laboratory of Animal Disease Control and Prevention, College of Veterinary Medicine, Lanzhou University, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agriculture Sciences, Lanzhou, China.
概括
一种新的RPA-CRISPR/Cas12a测定方法提供了快速,便携且具有成本效益的布鲁塞拉细菌检测. 这种方法提供了高的特异性和灵敏度,优于传统的诊断方法,用于菌病监测.
科学领域:
- 兽医微生物学 兽医微生物学
- 分子诊断学 分子诊断学
- 动物传染病研究研究
背景情况:
- 由布鲁塞拉菌引起的病,在全球范围内造成了重大经济和健康损失.
- 目前的布鲁塞拉诊断 (培养,血清学,PCR) 具有BSL-3要求,复杂性和时间等局限性,阻碍了流行病学查.
- 需要快速,便携式,敏感和特定的布鲁塞拉检测方法.
研究的目的:
- 开发和验证一种新的,快速的,便携的,具有成本效益的诊断方法来识别布鲁塞拉属.
- 建立基于复合酶聚合酶放大 (RPA) 与CRISPR/Cas12a技术相结合的检测系统.
- 优化和评估RPA-CRISPR/Cas12a测试对布鲁塞拉检测的性能.
主要方法:
- 设计了特定的RPA原始酶和CRISPR/Cas12acrRNA,以Brucella bcsp31基因为目标.
- 开发了基于优化的RPA-CRISPR/Cas12a系统的光和侧流带 (LFS) 测试.
- 使用临床样本评估测试性能,包括检测极限 (LoD),特异性和与qPCR一致性.
主要成果:
- 在RPA-CRISPR/Cas12a试验中,获得了1副本/μL (光) 和10副本/μL (LFS) 的LoD.
- 整个测试过程在不到30分钟内完成.
- 在各种临床样本 (血液,血清,牛奶,精液,阴道分泌物) 中表现出对相关病原体的优异特异性和与qPCR的高一致性.
结论:
- 开发的RPA-CRISPR/Cas12a试验是一种快速,便携,可靠和廉价的布鲁塞拉检测工具.
- 这项技术在野外监测和临床诊断菌病方面具有显著的潜力.
- 提供了传统诊断方法的有希望的替代方案,解决了当前敏感性,特异性和速度的局限性.
