针对小鼠棕色脂肪细胞的向基因操纵和发热评估的协议
Jakub Bunk1, Drishti Soni1, Matthias Calderon2
1Rosalind & Morris Goodman Cancer Institute, McGill University, Montreal, QC H3A 1A3, Canada; Department of Biochemistry, McGill University, Montreal, QC H3G 1Y6, Canada.
STAR protocols
|December 31, 2025
概括
这项研究提出了一种可复制的工作流程,用于生成Cre-依赖的腺相关病毒 (AAV) 载体,用于小鼠的细胞类型特异性基因传递. 该协议可以评估棕色脂肪细胞的热生成能力.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 神经科学是一个神经科学.
背景情况:
- 基因相关病毒 (AAVs) 被广泛用于体内基因传递的非整合载体.
- 对细胞类型特定基因表达的精确控制对于研究基因功能至关重要.
- 棕色脂肪细胞在热生成中发挥着关键作用,使他们成为代谢研究的重要目标.
研究的目的:
- 建立一个可重复的工作流程,用于生成CRE-依赖的FLEX-AAV向量.
- 详细说明量化病毒标位和执行局部注射以实现向基因传递的方法.
- 为了证明对转基因棕色脂肪细胞的发热能力的评估.
主要方法:
- 产生依赖于Cre的FLEX-AAV向量.
- 使用定量PCR (qPCR) 来量化病毒标位.
- 在小鼠模型中进行局部注射的立体注射.
- 使用克拉克型电极呼吸计评估棕色脂肪细胞热生成.
主要成果:
- 为FLEX-AAV生产建立了一个强大且可重复的协议.
- 准确的病毒标位量化方法得到了验证.
- 在小鼠中成功实现了细胞类型特定的转基因表达.
- 成功测量了转基因棕色脂肪细胞的发热能力.
结论:
- 本工作流程促进了在体内用于细胞特异基因操纵的Cre-依赖AAVs的生成和应用.
- 该协议使得在特定细胞群体 (如棕色脂肪细胞) 中可靠地评估基因功能.
- 该方法支持对基因疗法和代谢调节的研究.
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