循环介导的异热放大与Pyrococcus furiosus argonaute系统相结合,用于快速检测星病毒
Fosheng Yang1, Zhong Liu1, Jianqiang Ye2
1Nanchang Key Laboratory of Novel Prevention and Control Agents for Animal Infectious Diseases, Institute of Animal Disease Prevention and Control, Jiangxi Agricultural University, College of Animal Science and Technology, Jiangxi Agricultural University, Nanchang, Jiangxi 330045, China; Jiangxi Provincial Engineering Technology Center for Animal Disease Prevention and Control Agents, Nanchang, Jiangxi 330045, China.
使用反转录循环介导的异热放大 (RT-LAMP) 和Pyrococcus furiosus Argonaute (PfAgo) 的新诊断方法可以快速,灵敏地检测星病毒 (GAstV). 这一突破有助于控制经济上重要的病原体.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 病原体检测检测 病原体检测
背景情况:
- 星病毒 (GAstV) 是一种新兴的病原体,在产业中造成严重的死亡率和经济损失.
- 快速准确的诊断方法对于控制GAstV疫情至关重要.
- 当前的诊断工具可能缺乏必要的速度,灵敏度或特异性,以有效地在现场应用.
研究的目的:
- 开发和验证一种新的,快速,准确和敏感的星病毒 (GAstV) 诊断试验.
- 将反转录循环介导同热放大 (RT-LAMP) 试验与Pyrococcus furiosus Argonaute (PfAgo) 系统相结合,以提高GAstV检测.
- 用临床样本评估开发的试验的诊断性能.
主要方法:
- 设计特定的原料和指导DNA (gDNA),针对GAstV基因组的保护区域.
- 优化RT-LAMP测定条件以获得最大的灵敏度和特异性.
- 使用已知的GAstV病毒负载和与其他禽类病毒和细菌进行交叉反应性测试的小组验证测试的验证.
- 使用临床样本与定量聚合酶连锁反应 (qPCR) 进行测试的性能比较.
主要成果:
- 开发的RT-LAMP-PfAgo试验实现了低至10个副本/μL的检测极限.
- 该试验表现出高特异性,没有与类帕沃病毒 (GPV),类肉毒病毒 (GoCV),布病毒 (TMUV),类类复原病毒 (MDRV) 或大肠杆菌 (E. coli) 的交叉反应.
- 59个临床样本的检测结果显示,LAMP-PfAgo测定和qPCR测定之间的阳性率完全一致.
结论:
- 结合RT-LAMP-PfAgo试验为GAstV诊断提供了一个简单,精确,快速和敏感的方法.
- 这种测试有可能成为早期检测和控制中的GAstV的有价值工具.
- 这些发现支持使用这种新型诊断方法来缓解由GAstV引起的产业的经济损失.
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