量化小分子与RNA探针之间的相互作用 代表肌性发育不良型1 使用亲和毛细血管电泳和UPLC-UV

科学领域:

• 生物化学和分子生物学
• 遗传学和基因组学 遗传学和基因组学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• 肌肉性缩症1型 (DM1) 是一种自体主导性疾病,由DMPK基因中CTG三核酸重复扩张引起.
• 扩大的CUG重复形成核焦点,隔离RNA结合蛋白并破坏拼接.
• 目前的治疗策略集中在针对有毒RNA的小分子上,以破坏这些相互作用.

研究的目的:

• 开发和验证一种亲和毛细管电泳 (ACE) 方法,用于量化小分子和CUG重复RNA之间的相互作用.
• 为了评估胺 (PTMD) 对病原性[CUG]95 RNA重复的结合亲和力和选择性,与对照[CUG]14重复相比.
• 为了选其他小分子与DM1RNA重复的潜在治疗相互作用.

主要方法:

• 开发一种微调的亲和毛细电泳 (ACE) 方法,用于可重复的迁移时间测量.
• 对胺素与[CUG]95和[CUG]14RNA探针结合的表面亲和常数 (Kaapp) 的量化.
• 使用超强性能液体染色学与紫外线检测 (UPLC-UV) 来对ACE结果进行正交验证.
• 使用ACE选小分子库,以识别与[CUG]95RNA模型相互作用的化合物.

主要成果:

• 该ACE方法显示了高可重复性,使准确的Kaapp计算.
• 胺对致病性[CUG]95RNA (Kaapp = 6.1 ± 0.4 × 10^3 M^-1) 具有显著的亲和力,对对照[CUG]14RNA (Kaapp = 3.8 ± 0.3 × 10^3 M^-1) 的亲和力较低,表明选择性.
• 通过UPLC-UV分析证实了ACE的结果,没有显著差异.
• 确定了neomycin和chloroquine是与致病性RNA模型相互作用的化合物.

结论:

• 开发的ACE方法是量化与DM1相关的小分子-RNA相互作用的可靠工具.
• 胺氨酸对有毒RNA重复表现出有希望的亲和力,支持其潜在的治疗评估.
• 氨酸和氨酸是作为DM1治疗药物进一步研究的新型候选药物,需要进行选择性评估.