开发一种敏感和特定的RPA-CRISPR/Cas12a试验,用于对HBVcccDNA的肝脏内定量
Pattida Kongsomboonchoke1, Chaiyaboot Ariyachet1,2, Pornchai Kaewsapsak2
1Center of Excellence in Hepatitis and Liver Cancer, Faculty of Medicine, Chulalongkorn University, Bangkok 10330, Thailand.
International journal of molecular sciences
|January 10, 2026
概括
一种新的RPA-CRISPR/Cas12a测定准确量化肝炎B病毒 (HBV) 在肝脏组织中的共闭圆形DNA (cccDNA). 这种敏感的方法有助于研究和治疗查HBV功能治愈.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 病毒学 病毒学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 乙型肝炎病毒 (HBV) 通过肝脏内共价封闭圆形DNA (cccDNA) 建立持久感染.
- 准确量化肝脏内ccccDNA对于评估抗病毒疗效和实现治疗HBV的功能性治疗至关重要.
- 目前用于cccDNA检测的方法可能缺乏所需的灵敏度或特异性.
研究的目的:
- 开发和验证一种新型,高度敏感和特定的测定方法,用于量化肝脏内HBVcccDNA.
- 将复合酶聚合酶放大 (RPA) 与CRISPR/Cas12a技术相结合,以提高检测能力.
- 用合成DNA和临床肝脏组织样本来评估试验的性能.
主要方法:
- 针对保存的HBVccDNA区域 (A-D基因型) 的CRISPRRNAs (crRNAs) 的设计和验证.
- 优化RPA和CRISPR/Cas12a反应条件,以获得最大的灵敏度和特异性.
- 用含有ccDNA的等离子体和HBV感染/未感染的人类肝脏组织样本测试试剂,将结果与qPCR进行比较.
主要成果:
- 该RPA-CRISPR/Cas12a系统表现出高灵敏度,检测到每次反应只有10个ccccDNA副本.
- 该试验没有显示与血清或血中的非cccDNAHBV形式的交叉反应性.
- 对肝脏组织的应用产生了90%的灵敏度和与qPCR (R2 = 0.9155) 的强相关性.
结论:
- 开发的RPA-CRISPR/Cas12a系统提供了一种强大,具有成本效益和可扩展的方法,用于敏感和特定的肝脏内HBVccDNA量化.
- 这种测试是HBV研究和高通量查旨在达到ccccDNA清除的疗法的一个有前途的工具.
- 该技术有助于评估针对慢性乙型肝炎的功能治疗的抗病毒治疗方法.
