改进的诊断工具可可靠地检测现代小麦马赛克病毒分离物

科学领域:

• 植物病理学 植物病理学
• 病毒学 病毒学
• 分子诊断学 分子诊断

背景情况:

• 准确的植物疾病诊断对于作物保护至关重要,但病毒分离物的基因组变异挑战了现有的检测方法.
• 菌体马赛克病毒 (TriMV) 和小麦条马赛克病毒 (WSMV) 对美国大平原的小麦作物造成了重大经济损害.
• 对于TriMV和WSMV的传统PCR原始剂显示,与科罗拉多州的分离物不可靠,导致大量测试样本的假阴性.

研究的目的:

• 开发新的,普遍适用的诊断工具,用于检测小麦中新出现的TriMV和WSMV分离物.
• 与现有方法相比,提高病毒检测的效率,灵敏度和特异性.
• 为可靠的植物病毒识别创建高通量和可访问的生物测试.

主要方法:

• 进行比较基因组分析,以确定用于初始设计的保存区域.
• 开发和验证使用定量PCR (qPCR) 检测WSMV和TriMV的新型通用原料.
• 设计一种多重PCR试验,用于同时检测两种病毒,以及一种色度循环介导同热放大 (LAMP) 试验,用于WSMV和/或TriMV检测.

主要成果:

• 新的通用原始体在qPCR中表现出16-18%更高的效率和16%更高的灵敏度,与既有原始体相比.
• 开发的原料对WSMV和TriMV具有很高的特异性 (E值接近零),并且与小麦基因组的交叉反应性很低 (E值=1.9-7.5).
• 多重PCR和LAMP测定都在检测WSMV和TriMV,包括新的科罗拉多分离物中被证明是可靠,特定和高度敏感的.

结论:

• 修改后的原料和新型生物测试 (多重PCR和LAMP) 为检测WSMV和TriMV提供了更高的准确性和可靠性.
• 这些增强的诊断工具对于经济上重要的小麦病毒的有效管理至关重要,特别是面对不断变化的病毒种群.
• 开发的LAMP检测方法提供了一种用户友好和敏感的方法,用于在各种环境中快速检测植物病毒.