从马体血清和血中隔离细胞外囊泡的比较分析,使用两个隔离方法进行结构和蛋白质学验证
Dominika Milczek-Haduch1,2, Magdalena Żmigrodzka3, Paula Kiełbik1
1Department of Large Animals Diseases and Clinic, Institute of Veterinary Medicine, Warsaw University of Life Sciences, Warsaw, Poland.
尺寸排除色谱 (SEC) 提供了一种可复制的方法,用于从马血清中分离细胞外囊泡 (EV),从而产生高质量的生物标志物发现制剂.
科学领域:
- 兽医医学 兽医医学 兽医医学
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs) 对于细胞间通信至关重要,并具有作为生物标记物的潜力.
- 从马类生物流体中分离高质量的电动汽车存在重大挑战.
- 需要标准化的方法来可靠地隔离和分析马的EV.
研究的目的:
- 为了比较尺寸排除色谱 (SEC) 和微分超离心法,其次是SEC (UC+SEC) 来从马类血清和血中分离EV.
- 评估通过不同的方法和矩阵获得的电动汽车的效率,可重现性和蛋白质组概况.
- 确定用于生物标志物发现的马匹EV隔离的最佳工作流程.
主要方法:
- 马类血清和无血小板血是从六匹健康的马匹中处理的.
- 使用SEC和UC+SEC工作流程来隔离电动汽车.
- 描述涉及传输电子显微镜,纳米粒子跟踪分析和基于质谱的蛋白质组学.
主要成果:
- 与UC+SEC相比,SEC显示出更高的可复制性,蛋白质产量和更简单的工作流.
- 使用SEC处理的血清产生了与典型的EV标记器最一致的蛋白质组概况.
- 电动体表现出预期的形态和大小 (100-200纳米);蛋白质含量在血清和血来源之间有所不同.
结论:
- 选择的隔离方法和生物矩阵显著影响EV产量和蛋白质组合.
- 对马类血清应用的SEC提供了适合生物标志物发现的可复制,高质量的EV制剂.
- 这种方法比较突出了影响马匹EV分析的关键因素.
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