免提取可扩展样本准备,用于在血中快速检测艾滋病毒
Kelli N Shimazu1, Andrew T Bender1, Coleman Martin2
1Department of Mechanical Engineering, University of Washington, Seattle, Washington, 98195, United States.
开发快速,低成本的核酸放大测试,以检测血中的艾滋病毒是至关重要的. 这项研究介绍了一种无提取的样本准备方法,可以更快地在护理点诊断.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子诊断学 分子诊断
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 快速,低成本的核酸放大试验对于治疗点诊断至关重要,特别是对于传染病和病毒载荷监测.
- 当前的POC异热放大测试通常依赖于鼻或唾液,由于抑制剂和样本复杂性,当适应血时面临挑战.
- 无提取样本制备方法为复杂的生物矩阵 (如血) 提供了简化的替代方案.
研究的目的:
- 开发和验证一种用于血液等离子体中检测HIV的无提取样本制备方法,使用反转录重组酶聚合酶放大 (RT-RPA).
- 为了使病毒RNA从血中快速,直接放大,而无需复杂的净化步骤,用于护理点应用.
主要方法:
- 开发了一种涉及快速热处理和还原剂的无提取样本制备协议,以抑制RNases和溶解血中的HIV病毒.
- 这种方法与管内和基于纸张的反转录复合酶聚合酶放大 (RT-RPA) 试验相结合.
- 该协议被优化为50至300μL的反应体积.
主要成果:
- 开发的方法在5分钟内实现了样品处理,在20分钟内实现了放大.
- 大容量反应 (50-300μL) 显示了艾滋病毒阳性血的检测限值为800个副本/毫升 (16个副本/反应).
- 该方法在基于管的和基于纸的格式中都被证明是有效的,这表明POC设备的多功能性.
结论:
- 已经建立了一种高效的,没有提取的样本制备方法,用于使用RT-RPA检测血中的HIV.
- 这种方法大大简化了样本处理,减少了POC诊断的时间和复杂性.
- 该方法有望扩大快速艾滋病毒检测和在护理点监测病毒载量的机会.
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