与光终身成像显微镜相关联刺激发射枯竭显微镜,以研究脏淋巴细胞上TIE2蛋白
Iulia-Aneta Dénes1, Irina A Okkelman2,3, Herlinde De Keersmaecker3
1Laboratory of Veterinary Morphology, Faculty of Veterinary Sciences, Ghent University, Ghent, Belgium.
研究人员使用先进的显微镜证实了TIE2受体在脏细胞上的存在. 这一发现,使用STED和FLIM,澄清了TIE2.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 显微镜的使用方法
- 脏生理学 脏生理学
背景情况:
- TIE2受体对血管稳定和重塑至关重要,主要研究在内皮细胞中.
- 由于显微镜的挑战,它在非内皮细胞 (如细胞) 上的存在是有争议的,并且很难确认.
- 传统的免疫光与组织自光和对膜蛋白的抗体特异性作斗争.
研究的目的:
- 为了最终检测和定位TIE2受体在细胞上.
- 克服传统显微镜在复杂组织中研究膜蛋白的局限性.
- 为了研究TIE2在小鼠细胞上的亚细胞局部.
主要方法:
- 利用刺激发射枯竭 (STED) 显微镜进行超分辨率成像 (<50 nm分辨率).
- 使用光终身成像显微镜 (FLIM) 来区分特定的TIE2信号与自光.
- 在被清除的,用抗体标记的小鼠脏组织上,相关的STED和FLIM.
主要成果:
- 证实了TIE2受体在小鼠细胞中的存在.
- 将TIE2映射到面向曼空间的细胞表面.
- 与内皮细胞相比,在皮细胞上观察到较低的TIE2表达水平.
结论:
- TIE2受体存在于脏的细胞上,特别是在面向曼空间的细胞表面.
- 对STED和FLIM显微镜的互补使用有效地克服了在生物组织中可视化膜蛋白的挑战.
- 这项研究提供了强有力的证据,证明TIE2在脏生理中的作用超出了内皮细胞.
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