扩展 ImmunoSpot® 测试检测罕见抗原特异性B细胞的灵敏度到百万分之一,可能更低

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 记忆B细胞 (Bmem) 寿命长,对于快速回忆反应至关重要.
• 检测罕见的抗原特异性Bmem具有挑战性,但对于评估免疫史至关重要.
• 与Bmem检测相比,传统的血清抗体测量提供了有限的见解.

研究的目的:

• 建立可靠的方法来检测罕见的抗原特异性记忆B细胞 (Bmem) 在人体外围血液单核细胞 (PBMC) 中.
• 调查ImmunoSpot®测试对定量Bmem特定于SARS-CoV-2抗原的有用性.
• 为Bmem.mem的常规免疫监测提供指导.

主要方法:

• 利用ImmunoSpot®试验可视化单个B细胞的抗体分泌.
• 采用SARS-CoV-2 Spike (S) 和 Nucleocapsid (NCAP) 抗原来识别特定的Bmem.
• 在多个井中测试了大量的PBMC (2百万),以提高罕见细胞的检测灵敏度.

主要成果:

• 在SARS-CoV-2 S和NCAP特定的Bmem检测中实现了100%的诊断准确性.
• 通过增加PBMC输入和累积分泌足迹分析来优化试验灵敏度,特别是针对NCAP特定的Bmem.
• 证明了在不同前体频率下检测抗原特异性Bmem的能力.

结论:

• 开发和验证了可靠检测罕见抗原特异性Bmem的协议.
• 优化的 ImmunoSpot® 测试可超越传统的抗体标位,促进免疫监测.
• 这些方法可以适应检测Bmem特定于广泛的抗原.