一个自我裂变的ULP1-SUMO融合策略,用于在大肠杆菌中增强可溶性蛋白表达和单步净化
Changbin Jin1, Xiaohu Zhang1, Zhibo Yang1
1State Key Laboratory of Veterinary Public Health and Safety, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China.
这项研究引入了一种新型的双重融合标签,以提高E. coli (大肠杆菌) 中的重组蛋白质溶解度和表达. 该标签促进了单步净化,大大减少了蛋白质生产的时间和成本.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- 大肠杆菌 (E. coli) 是一种用于重组蛋白质生产的常见系统.
- 蛋白质不溶性是基于大肠杆菌的蛋白质表达的一个重大挑战.
- 传统的融合标签可以提高溶解度,但由于标签去除要求,复杂的净化.
研究的目的:
- 开发一个改进的融合标签系统,以提高重组蛋白的溶解性和表达.
- 为简化净化流程创建一个自剪标签.
- 为了减少与重组蛋白质生产相关的时间和成本.
主要方法:
- 使用触发因子 (TF) 和SUMO标签的并联融合.
- 评估了标蛋白质,猫结合粘附分子A (fJAMA) 和莱普托特里奇亚瓦迪 (Leptotrichia wadei) 的CRISPR相关蛋白13a (LwCas13a) 的溶解度和表达.
- 通过将SUMO蛋白酶Ulp1与SUMO融合,设计了一种新型的自剪切合标签.
主要成果:
- TF-SUMO双标签显著提高了fJAMA和LwCas13a的溶解度和表达.
- 工程自剪标签使得在表达和净化过程中能够自主删除标签.
- 为目标蛋白建立了一个单步净化协议.
结论:
- 这种新的双联聚变标签系统有效地提高了E. coli中的重组蛋白质溶解度和表达.
- 自切割机制简化了净化,提供了简化的工作流程.
- 这种方法减少了生产可溶性重组蛋白的总体时间和成本.
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