在复合腺相关病毒中对线性聚乙烯胺的量化,采用带有充电气溶检测的高性能液体染色学方法

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分析化学 分析化学
• 基因治疗制造业 基因治疗制造业

背景情况:

• 聚乙烯胺 (PEI) 是一种常见的转染试剂,用于腺相关病毒 (AAV) 生产.
• 剩余PEI存在毒性风险,需要在最终的基因疗法产品中进行准确的量化.
• 在AAV等复杂的生物样本中量化PEI是具有挑战性的,因为PEI与核酸相互作用.

研究的目的:

• 开发和验证一种可靠的分析方法,用于在纯化的AAV样本中量化残余线性PEI.
• 在复杂的生物矩阵中克服与PEI量化相关的挑战.
• 为基因疗法制造提供可靠的质量控制工具.

主要方法:

• 高性能液态色谱 (HPLC) 与充电气溶检测 (CAD) 相结合.
• 样品的制备包括在60°C下进行酸性处理 (三酸和盐酸),以去性质蛋白质和化核酸.
• 使用尖峰和恢复研究的验证,以确定方法的灵敏度和准确性.

主要成果:

• 开发的HPLC-CAD方法在PEI量化方面表现出高灵敏度和特异性.
• 达到5μg/mL的检测极限 (LOD) 和10μg/mL的量化极限 (LOQ).
• 通过视觉峰值识别确认了量化,确保了可靠性.

结论:

• 经过验证的HPLC-CAD方法提供了一种敏感,特定和可重复的方法来测量rAAV产品中的残留PEI.
• 这种方法对于过程监测和确保基因疗法制造的安全性和质量是有价值的.
• 该技术有效地解决了在复杂的生物样本中量化PEI的挑战.