在HEK293细胞中调节ER居民转录因子NFE2L1
Maiko Yasui1, Izumi Nagae2, Ryoichi Murase1
1Department of Chemistry and Biomolecular Science, Faculty of Engineering, Gifu University, 1-1 Yanagido, Gifu 501-1193, Japan.
核因子红色素衍生的2像1 (NFE2L1) 调节与CREB3/ATF6家族成员不同,与ER相关的降解 (ERAD) 因素如SEL1L/Hrd1显著影响其表达和稳定性. 这突显了内细胞网膜中多样化的N-糖化蛋白调节.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 核因子红色素衍生的2像1 (NFE2L1) 是一个经过N-糖化处理的内分泌网膜 (ER) 膜蛋白.
- NFE2L1与ER居民因子有相似之处,例如cAMP反应元件结合蛋白3 (CREB3) /ATF6家族成员.
- 了解NFE2L1规则对于理解ER中的蛋白质加工至关重要.
研究的目的:
- 为了研究NFE2L1蛋白表达的调节.
- 将NFE2L1规则与CREB3/ATF6家族成员的规则进行比较.
- 阐明ER-相关降解 (ERAD) 因素在NFE2L1稳定性中的作用.
主要方法:
- 用蛋白酶抑制剂 (MG132,博特佐米布) 和VCP抑制剂 (CB-5083) 治疗野生型和ERAD缺乏的HEK293细胞.
- 在ERAD因子 (SEL1L/Hrd1,EDEM2,TXNDC11,gp78,RNF5,RNF185,USP19) 遗传缺陷的细胞中分析NFE2L1蛋白表达和稳定性.
- 构建和分析NFE2L1突变体与改变的DDI2裂变点和N-糖化残留物.
主要成果:
- 在野生型细胞中,NFE2L1的表达是可以忽略不计的,但是由蛋白酶体抑制剂诱导的.
- SEL1L/Hrd1的损失显著增加了NFE2L1的表达,而其他测试的ERAD因子的缺陷没有影响.
- 较高分子量,全长的NFE2L1形式不太稳定,特别是低糖化突变物.
结论:
- NFE2L1规则与CREB3/ATF6家族成员有所不同,特别是在ERAD路径方面.
- 在控制NFE2L1蛋白水平方面,SEL1L/Hrd1起着至关重要的作用.
- NFE2L1的稳定性受其糖化状态和DDI2裂变的影响,这表明在ER中调节N-糖化蛋白的各种机制.
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