在常规诊断中开发一种全自动,高通量分子试验,用于检测老鼠肝炎E病毒

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 分子诊断学 分子诊断
• 公共卫生 公共卫生

背景情况:

• 在全球范围内,老鼠肝炎E病毒 (ratHEV) 对人类的感染正在出现.
• 现有的人类HEV诊断试验无法检测由于显著的遗传差异而导致鼠HEV.
• 对于人类样本中老鼠HEV的特定诊断工具的需求至关重要.

研究的目的:

• 为人类血和便开发和验证实验室开发的老鼠HEV RT-qPCR测定方法.
• 在符合"体外诊断法规" (IVDR) 的全自动化,高吞吐量平台上实施测试.
• 评估试验的分析性能和用于检测老鼠HEV的包容性.

主要方法:

• 针对使用IVDR级试剂的cobas 5800/6800/8800系统,优化已发表的原料和探针.
• 使用细胞培养衍生病毒颗粒评估分析灵敏度,线性范围和精度.
• 使用各种老鼠HEV菌株进行包容性测试,并对相关病毒进行交叉反应性评估.

主要成果:

• 该试验显示出高分析灵敏度,检测极限为血中的98.9副本/毫升和便中的60.3副本/毫升.
• 在广泛的动态范围中观察到出色的线性 (r2 > 0.99) 和高精度 (<0.62 ct).
• 该试验在肝脏和血样本中成功检测出各种老鼠HEV亚基因型,在交叉反应性测试中没有显示错误阳性.

结论:

• 一个完全自动化的,符合IVDR的老鼠HEV RT-qPCR测定已成功建立用于常规人类诊断.
• 该测试可在人体血和便样本中可靠检测大鼠HEV RNA.
• 需要进行进一步的研究,以确定老鼠HEV感染在不同人群中的临床意义.