与BSL-2安全法规相容的原生全长TDP-43的重新折叠辅助净化

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 神经科学是一个神经科学.

背景情况:

• 塔尔DNA结合蛋白43 (TDP-43) 与ALS和FTD等神经退行性疾病有关.
• 目前的安全法规要求对类蛋白质进行生物安全级别-2 (BSL-2) 的制,使TDP-43的生产复杂化.
• 在体外研究中,一致的全长TDP-43的生产是必不可少的.

研究的目的:

• 描述TDP-43.3的重新折叠辅助净化协议.
• 为了在标准的BSL-2实验室中实现安全和成本效益的本地TDP-43的生产.
• 提供一种适应其他子类,聚合性蛋白质的方法.

主要方法:

• 在大肠杆菌中表达全长TDP-43的表达.
• 在变质条件下 (4M尿素) 使用耐受EDTA/DTT的Ni2+-NTA树脂捕获IMAC.
• 通过梯度尿素洗重新折叠柱上,然后去除SUMO标签和质量控制管道 (SDS-PAGE,免疫包裹,质量摄影,CD,光异性,光散射).

主要成果:

• 一个强大的协议,用于从可溶性分数中重新折叠辅助净化TDP-43.
• 在标准BSL-2实验室的基本设备中,实施是可行的.
• 一个全面的质量控制管道确保了蛋白质完整性,纯度,寡合体状态,二次结构和稳定性.

结论:

• 开发的协议提供安全,成本效益和可重复的访问本地类型的全长TDP-43.
• 该协议包括BSL-2标准操作程序,用于处理类蛋白质.
• 这种方法很容易适应生产其他容易聚合的蛋白质.