基于CRISPR/Cas13a的简单方法快速检测无PCR放大无需PCR扩增的花生芽瘤病毒的第一份报告

科学领域:

• * 植物病理学 植物病理学
• * 分子诊断学 分子诊断学
• * 生物技术 * 生物技术

背景情况:

• * 核桃芽亡病毒 (GBNV) 在全球范围内对日和豆类作物产生重大影响.
• * 快速和敏感的诊断对于早期发现GBNV和疾病管理至关重要.
• *现有的方法可能缺乏及时干预所需的速度或灵敏度.

研究的目的:

• * 开发和验证一种基于CRISPR/Cas13a的新型GBNV诊断试验.
• * 为了证明该试验在没有放大的情况下对GBNV检测的灵敏度和特异性.
• * 评估基于CRISPR的诊断平台在现场部署的潜力.

主要方法:

• *对LshCas13a蛋白的克隆和表达以及针对GBNV核体 (NP) 和运动蛋白 (MP) 基因的引导RNA的合成.
• * 形成CRISPR核糖蛋白 (RNP) 综合体.
• * 检测GBNVRNA使用基于光的记者测定与纯化的RNA或原始植物提取物.

主要成果:

• *CRISPR/Cas13a测定成功检测到没有放大的GBNVRNA.
• * 实现了高灵敏度,检测到低至0.01 ng的GBNV.
• * GBNV可以检测到受感染的西红叶的原始提取物中,这表明其在现场适用性.

结论:

• *开发的CRISPR/Cas13a试验是一种快速,灵敏,无放大,用于GBNV的诊断工具.
• * 该试验可在现场部署,为植物疾病诊断提供了重大进展.
• * 这项工作为开发其他植物RNA病毒的CRISPR诊断提供了基础.